Problemele și soluțiile comune în procesul de sinteză a peptidelor includ următoarele aspecte:
Conținutul de peptide: conținutul de peptide se referă la procentul de substanțe peptidice dintr-o probă în raport cu substanțele nepeptidice. În produsele peptidice, pe lângă peptida în sine, sunt incluse și componente non-sare introduse în timpul procesului de producție, cum ar fi apa, solvenții absorbiți, ionii de coordonare și sărurile.
Stabilitate chimica:
Reacția de deamidare: reziduurile Asn/Gln sunt ușor hidrolizate pentru a forma Asp/Glu.
Hidroliza: Legăturile peptidice din peptide sunt ușor rupte prin hidroliză, în special cele formate prin participarea Asp, în special legăturile peptidice Asp Pro și Asp Gly.
Reacția de racemizare: Toate reziduurile de aminoacizi, cu excepția Gly, au atomi de carbon alfa chirali și sunt predispuse la reacția de racemizare sub cataliză alcalină. Reziduurile de asp sunt cele mai predispuse la reacții de racemizare.
- degradare prin eliminare: Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr și alte reziduuri pot fi toate degradate prin - eliminare, care este mai probabil să apară la pH alcalin și este afectată de temperatură și ionii metalici
Stabilitate fizica:
Denaturarea, adsorbția, agregarea sau precipitarea: Denaturarea peptidelor este de obicei legată de distrugerea structurilor terțiare și secundare. În starea denaturată, peptidele sunt mai predispuse la reacții chimice și activitatea lor este dificil de recuperat. Intermediarul format în timpul procesului de denaturare are o solubilitate scăzută și este predispus la agregare și precipitare
conservare:
Cele mai bune condiții de depozitare: peptidele sunt în general depozitate sub formă de pulbere liofilizată, care este foarte stabilă la -20 grade, mai ales după uscare prin congelare și depozitate într-un uscător de -20 grade. Majoritatea peptidelor pot fi păstrate la această temperatură timp de câțiva ani fără modificări. Pentru a reduce impactul umidității, peptidele liofilizate trebuie restabilite la temperatura camerei în condiții uscate înainte de a fi expuse la aer.
Ambalare: Hesheng Biotechnology recomandă ambalaje mici pentru a evita ciclurile repetate de îngheț-dezgheț, pentru a reduce numărul de deschideri și închideri ale containerelor, reducând astfel șansele de manipulare necorespunzătoare sau contaminări bacteriene și asigurând stabilitatea peptidelor.
Testarea purității:
Garanție de puritate: Toate peptidele livrate au atins puritatea necesară, iar peptidele care nu îndeplinesc standardul vor fi aruncate. Rezultatele detectării HPLC și MS pot verifica puritatea și greutatea moleculară a peptidei, afișând în același timp principalele impurități.
Alte metode de detectare, cum ar fi analiza aminoacizilor sau analiza elementară, pot confirma compoziția de aminoacizi a peptidelor ca mijloc suplimentar de confirmare a peptidei.
Tehnologia de sinteză:
Sinteza peptidelor în fază solidă: Sinteza peptidelor în fază solidă nu necesită purificarea produselor intermediare, permițând procese de sinteză continue și punând bazele automatizării sintezei peptidelor. Pe baza sintezei chimice Fmoc, peptida țintă a fost sintetizată prin legarea covalentă a grupării carboxil a aminoacidului C-terminal cu o rășină polimerică insolubilă și apoi pornind de la gruparea amino a aminoacidului.
Conținutul de mai sus rezumă problemele și contramăsurile comune în sinteza peptidelor, acoperind mai multe aspecte, cum ar fi stabilitatea chimică, stabilitatea fizică, condițiile de depozitare, testarea purității etc.