-
Telefon
+86-0755 2308 4243
-
Adresa
Camera 309, clădirea Meihua, parcul industrial din Taiwan, No.2132 Songbai Road, districtul Bao'an, Shenzhen, China
-
E-mail
FAQ
Ce metodologii de sinteză utilizează Biorunstar pentru sinteza peptidelor?
RE: Biorunstar a dezvoltat diferite metodologii de sinteză a fazei soluției pentru a satisface cerințele clienților. De obicei, se aplică chimia Fmoc în fază solidă.
Cum expediați peptidele? Ce date QC vor fi furnizate?
RE: Toate peptidele vor fi expediate de DHL sau FedEx express ca în pulberea liofilizată în flacoane individuale bine etichetate, la temperatura camerei. Cu excepția peptidelor brute, care vor fi verificate numai prin spectrometrie MALDI-MASS, toate peptidele purificate sintetice vin cu raport de proiect (CoA), date MS și date HPLC. vor fi furnizate fișe de date care conțin caracteristicile cheie, cum ar fi secvența peptidei, puritatea, cantitatea, modificarea, datele spectrului de masă și datele HPLC.
Care este timpul tipic pentru sinteza peptidelor? Cât durează expedierea către mine?
RE: Timpul nostru tipic este de 2-3 săptămâni pentru o peptidă standard sub 30 de aminoacizi. Timpul de întoarcere variază în funcție de lungimea, cantitatea, solubilitatea și dificultatea peptidei. De obicei, 3-5 zile pentru a ajunge la cercetători din alte țări.
Cât timp poți sintetiza?
RE: Biorunstar are o vastă experiență în sintetizarea peptidelor lungi, până la 130aa. Spre deosebire de mulți furnizori de peptide care se simt confortabil doar să producă peptide sub 30 sau 40aa, Biorunstar are o experiență bună în producerea de peptide de la 40aa la 90aa. Este dificil să sintetizezi peptide lungi, în special 100aa sau mai lungi. Dacă intenționați să sintetizați o secvență de 130aa sau mai mult, vă rugăm să ne contactați pentru un serviciu personalizat de exprimare și purificare a proteinelor.
Ce se întâmplă dacă apar unele probleme în timpul procesului de sinteză sau purificare?
RE: Fiecare peptidă are caracteristicile sale specifice. Dacă în timpul sintezei apar unele probleme peste așteptările noastre și nu vă putem livra peptida la timp, vă vom informa cât mai curând posibil. Din întâmplare că nu putem produce peptida, nu veți fi taxat pentru niciun cost.
Forma de sare TFA, formă de sare acetat sau HCl: Ce formă ar trebui să aleg?
În mod implicit, peptidele sunt sintetizate în sare TFA. Pentru experimentele legate de cultura de celule sau țesuturi, ar trebui să luați în considerare producerea de peptide sub formă de acetat sau sare de HCI la 98% sau mai mare pentru a evita răspunsurile anormale. Forma de sare de acetat sau HCl poate fi solicitată la un cost suplimentar.
Care este perioada de valabilitate a unei peptide?
RE: Peptidele sunt stabile minim un an dacă sunt depozitate liofilizate în congelator. Dacă peptidele sunt dizolvate, perioada de valabilitate poate fi redusă. Dacă peptidele conțin mai mulți aminoacizi reactivi care pot fi oxidați, cum ar fi Trp, Met, dar mai ales Cys, perioada de valabilitate ar putea fi, de asemenea, redusă.
Peptida conține mai multe cisteine și, prin urmare, poate forma cu ușurință legături disulfurice. Cum evit asta?
RE: Dacă secvența de peptidă conține mai multe cisteine sau alți aminoacizi reactivi, care se oxidează ușor, Biorunstar se oferă să livreze peptida cu urme ale reductorului puternic DTT. Peptida este livrată numai cu DTT dacă acest lucru este permis în mod specific de către client.
Cum îmi păstrez peptidele sintetice?
RE: Majoritatea peptidelor liofilizate vor fi stabile la temperatura camerei timp de 2-3 săptămâni. Pentru depozitarea pe termen lung, ar trebui să păstrați peptidele liofilizate la -20 grade . Ciclurile repetate de îngheț-dezgheț trebuie evitate. Se lasă să ajungă la temperatura camerei înainte de deschidere. Perioada de valabilitate a soluțiilor de peptide este limitată; o soluție de peptide odată preparată trebuie utilizată cât mai curând posibil.
Care este puritatea peptidei brute și a peptidei desarate? Cum purifică peptida? Care sunt impuritățile?
RE: Pentru peptidele scurte cu secvențe normale sub 15aa, este în general 40-60% prin HPLC pentru gradul brut; 50-70% prin HPLC pentru gradul desarat. Cu cât peptida este mai lungă, cu atât puritatea este mai mică pentru brut sau desarat. Peptidele sunt în general purificate prin HPLC folosind apă și gradient de acetonitril. Cele mai multe impurități sunt fragmente sau peptide de deleție, peptide incomplet deprotejate și sare reziduală și apă.
Explicația purității peptidei prin HPLC, conținutului total de peptide și conținutului de peptidă țintă.
RE: Biorunstar livrează peptide în funcție de greutatea brută a pulberii liofilizate. Pulberea liofilizată include impurități precum fragmente sau peptide de deleție, peptide incomplet deprotejate, TFA și apă reziduală. Puritatea peptidei este măsurată prin HPLC. Este cantitatea de peptidă corectă în raport cu toți analiții care absorb la ~214 nm (legatura peptidică absoarbe), cel mai probabil ștergerea, trunchierea sau secvențele incomplet deprotejate etc. Puritatea peptidei prin HPLC nu ia în considerare apa și sărurile. care sunt de obicei prezente în probă. Conținutul total de peptide este procentul de peptide totale prezente față de tot ceea ce este prezent în pulberea de peptide liofilizate. Conținutul total de peptide este determinat prin analiza conținutului de azot. Conținutul de peptidă țintă din pulberea de peptidă liofilizată poate fi astfel concluzionat prin formula: Conținutul total de peptide X Puritatea peptidei prin HPLC.
Care este metoda de etichetare cu fluoresceină?
RE: FITC (izotiocianatul de fluoresceină) este precursorul activat utilizat pentru etichetarea fluoresceinei. Pentru etichetarea Nterminală eficientă, un aminohexanoil cu șapte atomi
distanțier (NH2-CH2-CH2-CH2-CH{2-CH{2-COOH) este introdus între fluorofor (fluorosceină) și N-terminal al peptidei. Acest distanțier ajută la separarea fluoroforului de punctul său de atașare, reducând potențial interacțiunea fluoroforului cu biomolecula cu care este conjugat și făcându-l mai accesibil pentru reactivii secundari de detecție.
distanțier (NH2-CH2-CH2-CH2-CH{2-CH{2-COOH) este introdus între fluorofor (fluorosceină) și N-terminal al peptidei. Acest distanțier ajută la separarea fluoroforului de punctul său de atașare, reducând potențial interacțiunea fluoroforului cu biomolecula cu care este conjugat și făcându-l mai accesibil pentru reactivii secundari de detecție.
Este posibilă marcarea C-terminală a Biotinei (sau FITC)?
RE: Da. Marcarea C-terminală a Biotinei (sau FITC) se face prin adăugarea unui rest de lizină la capătul C-terminal al unei peptide, iar biotina (sau FITC) este atașată la lanțul lateral de lizină printr-o legătură amidă. Sarcina pozitivă a lizinei este îndepărtată.
Care este lungimea adecvată a peptidei pentru producerea de anticorpi?
RE: În general, se recomandă o peptidă reziduală 10-25. O peptidă mai lungă ar putea avea mai mulți epitopi, dar ar putea avea și o șansă mai mare de a forma structuri secundare stabile care nu sunt forme native. O peptidă mai scurtă (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Ce este o HARTĂ?
RE: MAPS sau Multi-Antigenic Peptide este o peptidă ramificată la care lanțurile peptidice liniare sunt legate la capătul lor C-terminal prin miez de polilizină, crescând astfel dimensiunea întregii molecule. Acest lucru se face pentru a elimina cuplarea peptidelor la KLH. Se pare că, totuși, conformația peptidelor pe MAP este mai puțin flexibilă, iar anticorpii obținuți prin MAP recunosc de obicei proteina țintă mai rar decât prin conjugarea KLH convențională. În plus, nu există nicio peptidă liberă produsă la producerea MAPS, ceea ce face dificilă îndepărtarea anticorpilor direcționați de miez de polilizină. Purificarea MAPS prin HPLC este dificilă, iar MAPS este furnizat fără verificarea masei datorită heterogenității sale și dimensiunii moleculare mari.
De ce soluția mea de peptide conjugate cu KLH pare tulbure?
RE: KLH sau Keyhole Limpet Hemocianina este o proteină mare de agregare (MW=4x105 – 1x107). Din cauza dimensiunii și structurii sale, solubilitatea sa în apă este limitată, provocând un aspect tulbure. Acest lucru nu va afecta imunogenitatea și soluția tulbure poate fi utilizată pentru imunizări.
Puteți explica vârfurile de masă M+Na și M+K în spectrele MALDI?
RE: Este foarte frecvent să vezi aducti Na (sodiu) și K (potasiu) în spectrul MALDI. Sodiul și potasiul provin din apa folosită în solvenții peptidici. Chiar și apa distilată și deionizată are urme de ioni de sodiu și potasiu, care nu pot fi niciodată îndepărtate în întregime. Acestea devin ionizate în timpul procesului de spec. de masă MALDI și se leagă de grupările carboxil libere ale peptidei. Deoarece nu există un sistem de purificare a apei care să elimine fiecare ion de sodiu sau potasiu din apă, a se vedea uneori aductii de sodiu și potasiu este foarte comun și inevitabil în specificațiile de masă MALDI. Acesta nu este un indiciu că peptida nu este pură și nici nu trebuie confundată cu o greutate moleculară incorectă.