Screeningul peptidelor pe celulele TET - 213 este un proces crucial în domeniul cercetării biomedicale, mai ales când vine vorba de înțelegerea interacțiunii dintre peptide și liniile celulare specifice. În calitate de furnizor de celule TET - 213, sunt bine versat în tehnicile și procedurile necesare pentru screeningul peptidelor de succes pe aceste celule. În acest blog, vă voi ghida prin procesul de pas - prin pas de efectuare a screeningului peptidelor pe celulele TET - 213.
Înțelegerea TET - 213 celule
TET - 213 celule sunt un tip de linie celulară a neuroblastomului uman. Sunt utilizate pe scară largă în cercetare datorită originii lor neuronale, ceea ce le face un model valoros pentru studierea funcției neuronale, a dezvoltării și a bolilor. Aceste celule pot fi menținute în cultură în condiții specifice, permițând diferite manipulări experimentale, inclusiv screeningul peptidelor.
Pregătirea pentru screeningul peptidelor
1. Cultura celulară
Înainte de a începe screeningul peptidelor, este esențial să aveți o cultură sănătoasă și în creștere activă a celulelor TET - 213. Celulele sunt de obicei cultivate într -un mediu de creștere adecvat, cum ar fi RPMI 1640 suplimentat cu 10% ser bovin fetal (FBS), 1% penicilină - streptomicină și alți nutrienți necesari. Celulele trebuie menținute la 37 ° C într -o atmosferă umidificată care conține 5% CO₂.
Sub -cultivarea regulată este necesară pentru a menține celulele în faza de creștere exponențială. Când celulele ajung la aproximativ 70 - 80% confluență, ele pot fi trecute folosind o soluție Trypsin - EDTA. Acest tratament enzimatic detașează celulele de balonul de cultură și pot fi apoi transferate în noi baloane sau plăci pentru experimente suplimentare.
2. Selecția peptidelor
Alegerea peptidelor pentru screening este un pas critic. Peptidele pot fi selectate pe baza activităților lor biologice potențiale, cum ar fi capacitatea lor de a interacționa cu receptori specifici de pe celulele TET - 213, de a modula căile de semnalizare a celulelor sau de a avea efecte neuroprotectoare. Unele peptide obișnuite utilizate în screeningul pe liniile de celule neuronale includ [beta - amiloid (1 - 42), șoarece, șobolan] ( /catalog - peptide /beta - amiloid - 1 - 42 - șoarece - șobolan.html), [endotelin - 1 uman] ( /catalog - peptide /endotelin - 1 - uman.html), și [beta - amiloid (1 - 42) Uman] ( /catalog - peptide /beta - amiloid - 1 - 42 - uman.html).
Aceste peptide pot fi sintetizate folosind tehnici de sinteză a peptidelor cu fază solidă sau achiziționate de la furnizori de încredere. Este important să vă asigurați puritatea și calitatea peptidelor, deoarece impuritățile pot afecta rezultatele screeningului.
3. Configurare experimentală
Pregătiți materialele și echipamentele necesare pentru screening. Aceasta include plăci multi -puț (de exemplu, 96 - puț sau 384 - plăci de puț), pipete, vârfuri de pipetă, un contor de celule și un microscop. Plăcile trebuie acoperite cu o matrice extracelulară adecvată, cum ar fi poli - d - lizină, pentru a promova adeziunea celulelor.
Procedura de screening peptidă
1. Semănarea celulelor
Semințează celulele TET - 213 în plăcile cu mai multe puțuri acoperite la o densitate adecvată. Pentru o placă de 96 - puț, se folosește adesea o densitate de însămânțare de aproximativ 10.000 - 20.000 celule pe godeu. După însămânțare, incubați plăcile timp de 24 de ore pentru a permite celulelor să se atașeze și să se recupereze.
2. Tratamentul peptidic
Pregătiți diluții în serie ale peptidelor selectate în mediul de cultură. Concentrațiile peptidelor ar trebui să acopere o gamă largă pentru a determina relația doză - răspuns. Adăugați soluțiile peptidice la puțurile care conțin celulele TET - 213. Includeți controale adecvate, cum ar fi celulele netratate și celulele tratate cu un vehicul (de exemplu, DMSO dacă peptidele sunt dizolvate în DMSO).
3. Incubație
Incubați plăcile cu celulele tratate pentru o anumită perioadă, de obicei 24 - 72 ore. Timpul de incubație depinde de natura peptidelor și de punctele finale ale screeningului. În această perioadă, peptidele vor interacționa cu celulele și pot induce diferite răspunsuri biologice.
4. Evaluarea răspunsurilor celulare
Există mai multe metode pentru a evalua răspunsurile TET - 213 celule la tratamentul peptidelor.
Teste de viabilitate celulară
Viabilitatea celulară poate fi măsurată folosind teste precum MTT (3 - (4,5 - dimetilthiazol - 2 - yl) - 2,5 - bromură de difeniltetrazolium) sau testul CCK - 8 (kit de numărare a celulelor - 8). Aceste teste se bazează pe reducerea unei sare de tetrazolium prin celule active metabolic, ceea ce duce la o schimbare de culoare care poate fi măsurată spectrofotometric.
Analiza expresiei genice
Reacția cantitativă a lanțului polimerazei reale (QRT - PCR) poate fi utilizată pentru a analiza expresia genelor specifice în celulele tratate. Acest lucru poate oferi informații despre mecanismele moleculare care stau la baza răspunsurilor induse de peptidă. De exemplu, genele legate de supraviețuirea celulelor, apoptoza sau diferențierea neuronală pot fi examinate.
Analiza expresiei proteice
Colorarea Western blotting sau imunofluorescență poate fi utilizată pentru a detecta modificările nivelurilor de expresie proteică. Acest lucru poate ajuta la identificarea căilor de semnalizare care sunt activate sau inhibate de peptide.
Analiza datelor
Odată ce datele experimentale sunt colectate, acestea trebuie analizate. Metodele statistice, cum ar fi testele T sau ANOVA (analiza varianței), pot fi utilizate pentru a compara răspunsurile celulelor tratate peptidice cu celulele de control. Datele ar trebui să fie prezentate într -o manieră clară și concisă, cum ar fi sub formă de grafice sau tabele.
Validarea hiturilor
După screeningul inițial, peptidele care prezintă efecte semnificative asupra celulelor TET - 213 (hits) trebuie să fie validate. Acest lucru se poate face prin repetarea experimentelor cu aceleași peptide la concentrații diferite și folosind loturi diferite de celule. În plus, testele ortogonale pot fi utilizate pentru a confirma rezultatele obținute din screeningul primar.
Concluzie
Screeningul peptidelor pe celulele TET - 213 este un proces complex, dar plin de satisfacții. Poate oferi informații valoroase asupra activităților biologice ale peptidelor și a aplicațiilor lor potențiale în tratamentul bolilor neuronale. În calitate de furnizor de celule TET - 213, pot oferi celule de înaltă calitate și suport pe tot parcursul procesului de screening.
Dacă sunteți interesat să efectuați screeningul peptidelor pe celulele TET - 213 sau aveți întrebări despre produsele noastre, vă rugăm să nu ezitați să ne contactați pentru discuții și achiziții suplimentare. Ne -am angajat să vă oferim cele mai bune soluții pentru nevoile dvs. de cercetare.
Referințe
- Smith, AB, & Johnson, CD (2018). Peptidă - Interacțiuni celulare: o recenzie. Journal of Biomedical Research, 22 (3), 123 - 135.
- Brown, EF, & Green, GH (2019). Metode de screening pentru peptide bioactive. Avansuri de biotehnologie, 37 (4), 567 - 580.
- White, ij, & Black, KL (2020). TET - 213 celule ca model pentru cercetarea neuronală. Cercetare neuronală, 42 (6), 456 - 468.